谷氨酸積累的理想途徑及谷氨酸消泡劑
發布時間:2012-08-21 14:39:42
1. 谷氨酸積累的理想途徑應具備的條件:
① 一定的糖酵解速度,不能走向乳酸等的發酵;
② 生成丙酮酸后,一部分氧化脫羧生成乙酰,一部分固定CO2生成草酰乙酸或蘋果酸,草酰乙酸與乙酰在檸檬酸合成酶催化作用下,縮合成檸檬酸,再經下面的氧化還原共軛的氨基化反應生成谷氨酸;
③ 生成的乙酰不向脂肪酸途徑轉化,全部趨于合成檸檬酸方向;
④ ɑ-酮戊二酸氧化能力微弱,即不轉化為琥珀酸,而成為馬蹄形不完整的三羧酸環;
⑤ 異檸檬酸裂解酶活性弱,即不形成乙醛酸環;
⑥ 異檸檬酸脫氫酶活性強。曾發現,在喪失異檸檬酸脫氫酶的谷氨酸缺陷型中,雖有L-谷氨酸脫氫酶與谷氨酸消泡劑,卻不能生成谷氨酸,結果導致積累丙酮酸或二甲基丙酮;
⑦ L-谷氨酸脫氫酶活性強,在NH3存在下,由ɑ-酮戊二酸轉化為谷氨酸。這點特別重要,由于生物中谷氨酸的來源有兩條途徑,一是轉氨作用,由其它氨基酸轉化而來;二是還原氨基化,這是谷氨酸生產菌所依賴的。由于谷氨酸產生菌的谷氨酸消泡劑與谷氨酸脫氫酶的活性比其它微生物強得多,所以,由三羧酸循環所得檸檬酸的氧化中間物,就不能再往下氧化,而以谷氨酸形式積累起來;
⑧ NADPH再氧化能力欠缺。谷氨酸產生菌有兩種NADP專性脫氫酶,即異檸檬酸脫氫酶和L-谷氨酸脫氫酶。在谷氨酸生物合成中必須有谷氨酸脫氫酶、谷氨酸消泡劑和異檸檬酸脫氫酶的共軛反應,在氨離子存在下,兩者非常密切地偶聯起來,形成強固的氧化還原共軛體系,不與NADPH的末端氧化系相連接,使ɑ-酮戊二酸還原氨基化生成谷氨酸。谷氨酸產生菌需要氧化型NADP,以供異檸檬酸氧化用,生成的還原型NADPH又因ɑ-酮戊二酸的還原氨基化而再生為NADP;
⑨ 造成強的細胞膜透性,以便克服終產物反饋抑制和阻遏,使生產菌產生的谷氨酸不斷地滲到細胞外進入培養基中。
2. 淀粉質原料發酵生產谷氨酸
目前使用的谷氨酸生產菌都缺乏淀粉水解酶系,淀粉質原料的水解是必要的,當前主要通過酸法水解。酶法因費時,濾液不夠清澈等原因,采用的不多。
氮源目前多用尿素、氨水和碳酸氫銨,這些簡單氮源比有機氮源易為菌體所利用。氮源既在谷氨酸消泡劑的發酵液中加入,也在中間補料中補充,既作氮源,也為調節下降的pH所用。
生產因子中,除生物素外,維生素B與谷氨酸消泡劑對某些谷氨酸菌株的發酵有促進作用。這是隨菌株的特性而定,因初尿量大,pH高,有些菌株生長不良)。
發酵培養基滅菌后,按需要加入單獨滅菌的35%-40%尿素溶液,然后接入1%的種子液,通氣培養28-32h,即可放罐提取。
本文參考《發酵微生物學》一書。
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