生物發酵消泡劑與發酵生產的有關問題
發布時間:2012-11-07 16:14:14
(一)碳氮源
嘌呤核酸類物質的生物發酵消泡劑的發酵生產,碳源多用葡萄糖,可考慮使用淀粉水解液。氮源有氯化銨、硫酸銨或尿素等,需用量一般較高。
(二)無機鹽
對無機鹽的要求,各菌有所不同。肌苷生產菌中可溶性磷酸鹽多時,會顯著抑制肌苷的積累,而非水溶性磷酸鹽則具促進作用。作為肌苷酸生產的產氨短桿菌,有些菌株需要高達1%的磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀,也相應地添加高濃度硫酸鎂。
(三)氨基酸、嘌呤和維生素
加入酪朊氨基酸可促進菌體生長與IMP的積累,它的促進作用能為添加組氨酸、賴參酸、高絲氨酸、甘氨酸及丙氨酸的混合物(各4.0mg/L)所代替。
一般核酸類物質生產菌都是有關的營養缺陷型,培養基中加入亞適量的有關嘌呤或含有有關嘌呤的物質如酵母膏等是必需的。
(四)微量元素
使用產氨短桿菌,無論是從頭合成,還是補救合成,5'-IMP積累都受非常低濃度Mn2+的顯著影響。Mn2+限量時,會引起細胞形態變化,造成細胞伸長或膨脹,呈不規則形,積累IMP。若Mn2+過量,則IMP產量急減,轉換成次黃嘌呤發酵。在Mn2+限量和腺嘌呤亞適量下,生物發酵消泡劑在發酵過程的化學變化是不同的。在發酵初期(2-3天)積累次黃嘌呤,發酵后期(第3天后),IMP的生成與次黃嘌呤的消失同時進行。
生物發酵消泡劑在發酵培養第二天后,也發生細胞形態的變化,異常形態細胞迅速增多。這顯示細胞形態和積累IMP有著一種密切的關系。這是由于隨著這種異常形態細胞的出現,與IMP補救合成有關的磷酸核糖焦磷酸激酶、次黃嘌呤焦磷酸轉移酶及5ˊ-磷酸核糖等漏出胞外,分泌于培養基中,催化R5P,PRPP與Hx結合,形成IMP。當Mn2+過量時,并不發生這樣的分泌,上述物質仍留在菌體內。這表明,Mn2+與胞膜透性有著密切的關系。還有研究表明,在培養后期,由于突變株從頭合成途徑所形成的IMP也分泌于細胞外,排除相應的代謝抑制與阻遏作用,使細胞內IMP的生物合成繼續進行'再不斷地漏出外,在胞外積累IMP。
Mn2+與生物素都與細胞膜透性有關,產氨短桿菌也是要求生物素的菌株,那么它們之間有無聯系呢?研究表明,生物素添加量的控制僅影響菌的生長,而IMP只是在生物素充足、腺瞟呤適量時才積累;另一方面,通過控制Mn2+濃度,研究了IMP在發酵時細胞內脂肪酸含量的情況,發現Mn2+亞適量時,細胞內的脂肪酸含量反而增加,與生物素亞適量正好相反,表明兩者對細胞膜透性的機制是不一樣的。有人由產氨短桿菌誘變得到一株喪失GMP合成酶的鳥瞟呤缺陷型菌株,研究積累XMP的情況,當Mn2+過量時,盡管細胞形態呈正常的短桿狀,卻仍能積累XMP。
IMP與XMP只是在嘌呤堿基的第2位上有無羥基,然而兩者對細胞膜的滲透性卻迥然不同。這究竟是因為透過物質的化學性質決定的,還是由于細胞膜滲透機制專一性的原因,或是兩者相互作用的結果,尚不清楚。
在使用大型發酵罐的工業生產中,要把Mn2+控制在10-20 ug/L的濃度范圍內,并非易事,況且發酵工業上所用的工業原料和工業用水都含有較多的Mn2+。為了解決這個問題,可以采用兩種方法:一是在生物發酵消泡劑發酵期間添加表面活性劑,對積累IMP是有效的;另一種方法是選育對Mn2+中有抗性的突變株。
(五)培養條件
pH一般控制在5-7,范圍比較寬。溫度方面一般在30℃左右。特殊的是IMP生產中,發現有一枯草桿菌突變株在30℃培養時,不僅積累IMP,不副生次黃嘌呤。但在40℃培養時,卻僅有IMP的積累,其產量明顯增加;另一突變株在40℃培養,還能把添加于培養基中的次黃嘌呤高效率地轉化成IMP,這可以認為是由于Hx-IMP的補救途徑為溫度所激活的緣故。
本文參考《發酵微生物學》一書。
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